E，8，悬浮微生物的检测E，8。1.悬浮微生物的采样装置有以下两类，1，采用无源采样装置，如培养皿.2，采用有源采样装置 如撞击采样器.离心采样器，过滤采样器.E，8.2 空气洁净环境中悬浮微生物的静态或空态检测前,应对各类表面进行擦拭消毒.但不得对室内空气进行熏蒸.喷洒之类的消毒 动态检测均不得对表面和空气进行消毒。E.8，3.沉降菌检测应符合下列要求.1，使用直径90mm。Φ90,的培养皿采样 当采用其他直径培养皿时。应使其总面积和Φ90皿总面积相当,2，培养皿中灌注胰蛋白酶大豆琼脂培养基。必须留样作阴性对照,3，培养皿表面应经适当消毒清洁处理后,布置在有代表性的地点和气流扰动极小的地点。在乱流洁净室内培养皿不应布置在送风口正下方，4 当用户没有特定要求时.培养皿应布置在地面及其以上0 8m之内的任意高度、5，每一间洁净室或每一个控制区应设1个阴性对照皿。6，动态监测时也可协商布点位置和高度，7,培养皿数应不少于微粒计数浓度的测点数、如工艺无特殊要求应大于等于表E,8、3中的最少培养皿数.另外各加1个对照皿、8、当延长沉降时间时 可按比例减少最少培养皿数。为防止脱水、最长沉降时间不宜超过1h,当所需沉降时间超过1h.可重叠多皿连续采样 除非经过验证 证明更长的沉降时间可以基本按比例增加菌落数。9，培养皿应从内向外布置.从外向内收皿。10、每布置完1个皿,皿盖只允许斜放在皿边上,对照皿盖挪开即盖上，11 布皿前和收皿后.均应用双层包装保护培养皿.以防污染.12、收皿后皿应倒置摆放 并应及时放入培养箱培养 在培养箱外时间不宜超过2h，如无专业标准规定,对于检测细菌总数。培养温度采用。35。37。培养时间为，24 48,h.对于检测真菌，培养温度、27，29 培养时间3d.13 布皿和收皿的检测人员必须穿无菌服、但不得穿大褂.头 手均不得裸露，裤管应塞在袜套内.并不得穿拖鞋。14。对培养后的皿上菌落计数时，应采用5。10倍放大镜查看。若有2个或更多的菌落重叠、可分辨时则以2个或多个菌落计数 15.当单皿菌落数太大受到质疑时,可按以下原则之一进行处理,1 作为坏点剔除、2,重测 如结果仍大、以两次平均值为准 如结果很小。可再重测、3、重测该处微粒浓度、参考此结果作出判断，所有上述处理方法均应记录在案.16.每皿平均菌落数取到小数点后1位，17，动态监测时每点叠放多个平皿或采用可自动切换的仪器、每点应采满4h以上.每皿可采30min。当只放1个皿时.可少于4h 但不可少于1h E、8，4，浮游菌采样应符合下列要求。1、使用单级或多级撞击式采样器、离心采样器或过滤采样器 采样必须按所用仪器说明书的步骤进行 特别要注意检测之前对仪器消毒火菌.并对培养皿或培养基条做阴性对照.2，采样点数应不少于微粒计数浓度测点数 3.采样点应在离地0，8m高平面上均匀布置 或经委托方，用户,与检测方协商确定 乱流洁净室内不得在送风口正下方布点,静态或空态检测前对室内各种表面应作擦拭消毒，4 每点采样1次。如工艺无特殊要求、每次采样量应大于等于表E,8、4推荐的浮游菌最小采样量、每次采样时间不宜超过15min,不应超过30min 当洁净度很高.或预期含菌浓度可能很低时,采样量应大于最小采样量很多.以满足减少计数误差的要求 5。采样器应用支架固定,采样时检测人员应退出。手持离心式采样器除外。检测人员的穿戴同本附录E、8、3条第15款 必须手持采样器时,应将手臂伸直。站于下风向、6,采样后宜在2h之内将采样器中的培养皿或培养基条送入培养箱中培养。7,每点平均值取到小数点后1位.8,动态监测的测点位置 数量和高度由工艺并经协商确定，每间洁净室或每一个独立受控环境中各点总采样量，不分级别.均应大于1m3。每点可用多台采样器，9，单点菌落数太大时,应按附录E.8、3条第15款的原则处理。E，8,5.表面染菌密度检测应符合下列要求,1，对于洁净室内围护结构.设备等表面的微生物采样 应采用无菌棉拭子擦抹法，当表面很大、硬且平时.也可采用接触皿法。2、用规格板标定出面积为25cm2的区块、对于围护结构，每面结构不少于4块,对于设备 每件不少于2块,取样地点均协商确定,3,将无菌棉拭于含10mL稀释液试管中浸湿，于管壁上挤干后 对一区块擦抹采样,横竖往返8次、每一区块使用1根无菌棉拭。采样后.以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管中,经电动混匀器震荡20s或在手掌振打200次.4。取含菌液体1，0mL、以琼脂灌注法接种平皿 每个样本接种2个平皿.于.35，37。培养箱中培养、24，48。h后计数，5，必须将本次检测所用的稀释液。棉拭子.培养基等留样作阴性比照 6.具体事项遵照卫生部.消毒技术规范、执行、7。对于适用接触皿采样的表面,以无菌操作方式.先将培养基注入硬质或软质Φ55平皿。使培养基表面高出培养皿周边 测试时，将培养皿倒过来。使培养基表面均匀牢固地按压住整个区域5s。不得有环形或线性的运动，8，对于围护结构，每面结构应用不少于4个培养皿按压.对于设备。每件用不少于2个培养皿按压 9.按压取样后的培养皿,应在2h之内 于.35、37,培养箱中培养。24。48，h后计数，10 菌数平均数取到小数点后1位、